観察のポイント

I　観察するステ−ジ

　手術や、インジェクションを行った胚はなるべく頻繁に観察する。胞胚期や原腸胚期に観察しておかないと、あとで胚に異常が起こったときに原因がわからず、せっかく実験しても結果が使えなくなってしまうことがある。

Ａ．卵割期・胞胚期

　この時期の細胞は非常に壊れやすい。また、卵割に異常も起こりやすく、部分死の原因となる。胚の表面から細胞がこぼれ落ちるようにして遊離してくることもある。

チェックポイント

• 卵割は正常か？
• 卵割は遅れていないか？
• 胚は変形していないか？胚の変形は異常の原因となる。寒天の穴が丸くないと胚が変形することがある。
• 細胞がこぼれ落ちていないか（特に動物極側の表皮）？
• 細菌に感染していないか？感染していると培養液が酸性に傾き、フェノールレッドの色が黄色くなる。
• その他

Ｂ．原腸胚期

　原腸胚期は、劇的な細胞の移動や変化がおこる時期であり、胞胚期までは正常に発生しても原腸形成のときに死んでしまう胚がかなりある。また、中軸構造に異常が生じる場合、その原因の多くは原腸形成の異常に起因していることがある。特に、マイクロインジェクションを行った胚では、原口の陥入点あたりから細胞がこぼれ落ちることがある。観察の重点は、胞胚のときのチェックポイントに加えて、原口の形成が正常であるかどうかである。

チェックポイント

• 細胞分裂は正常か？
• 細胞分裂は遅れていないか？
• 胚は変形していないか？
• 細胞がこぼれ落ちていないか（特に動物極側の表皮や、原口付近）？
• 細菌に感染していないか？感染していると培養液が酸性に傾き、フェノールレッドの色が黄色くなる。
• 原口は正常に形成されたか？二次軸が形成されるときには、原口の背唇が二箇所に形成されることがある。

Ｃ　神経胚期

　神経胚まで正常に発生すれば、細菌の感染を除いて胚が死ぬことはあまり無くなる。この時期、脳や神経管が形成されるので、頭部や背側の形態形成に注意する。

チェックポイント

• 原腸の陥入は正常か？
• 神経板が閉じて、神経管が形成されているか？二次軸が形成されているときは神経板も二つでき、胴部からでる突起のように見える。
• 胚の前方に頭部の構造が形成されているか？脳の構造は形成されているか。

Ｄ　尾芽胚期


II　形態評価のポイント

Ａ　Dead or alive: 胚が生きているか、死んだ部分があるか。

　アフリカツメガエルの胚は部分的に死んでも調整して正常なオタマジャクシに発生することがあるので、原腸形成まで観察して、胚が部分的に死んでいないかどうか調べておく。多くの場合、

• Alive (al)
  　死んだ細胞が全く無いもの。
• Almost alive (aa) 僅かな部分死
  　胚の僅かな部分（全体の1/10程度）が死んだもの。寒天の穴の底に死んだ細胞が白く沈んでいる。
• Partially dead (pd)　部分死
  　胚半分以下くらいが死んだもの。寒天の穴の底に死んだ細胞が白く沈んでいる。
• Almost dead (ad)　部分的に生きているもの
  　胚の大部分が死んで僅かに一部が（1/4〜1/10程度）が生き残っているもの。
• Dead (d) 全死
  　生き残っている部分が全く無いもの。細胞質が外に出てしまって全体に白くなっている。

Ｂ　　陥入の様子

　胚の異常として比較的多いものに、原腸陥入の異常がある。原腸の陥入が不完全だと、後の発生で胚の後部の構造（特に尾芽や後部の神経管の形成）に異常を引き起こす。

• Normal 正常。正常に陥入したもの。
• Incomplete invagination (ii) 不完全陥入。
  　陥入が不完全で神経胚の時まで原口が閉じず内胚葉性の細胞が外に露出したもの。
• Exogastrula (exo) 外原腸胚
  　中胚葉や内胚葉予定の細胞が外胚葉の内側に陥入せず、胚の外側にでてきてしまったもの。
  

Ｃ　　頭、軸構造の形成

• Large head (lh) 巨頭
  　頭部の大きいもの
• Normal 正常
• Small head (sh)小頭
  　頭の構造の一部は形成されているが、脳や目の構造に欠損があるもの。
• No head (nh) 無頭
  　頭の構造が全くできなかったもの。
• Ventral piece 腹片
  　中軸構造が全く形成されず、丸まった胚を生じたもの。
• Curved (Cu) 湾曲
  　中軸構造が曲がっているもの。曲がっている方向によってcurved dorsally, curved ventrally, curved left, curved right 等がある。
  

Ｄ　　その他

• Slender (sl) 細身
  　主に部分死をおこした胚で見られる。正常胚より胴の部分が細い。
• Big posterior (bp) 後部肥大
  　だるまさんのように、後部が大きいもの。主に、胚の内部で細胞が死んでいるものが多い。
• Oedema (oe) 水庖
  　表皮の一部に水庖を生じたもの。他の部分に異常が無い場合正常胚に入れてもよい。
  

Ｅ．左右性の異常

左右対称な器官の一方の欠如

• Righ(left) eye deficient: 右（左）目の欠如　→small head
• Righ(left) ear deficient: 右（左）耳の欠如　→small head
• Righ(left) pronephron deficient: 右（左） 前腎の欠如　→切片で観察
• Righ(left) somites deficient: 右（左） 体節の欠如　→切片で観察
• Righ(left) epidermis deficient: 右（左） 表皮の欠如

実験形態学