FDAによる細胞の標識

1. 5％FDA　CMFS溶液をつくり、FDAストックとして冷凍庫に保存する。
2. FDAストックを10倍希釈して0.5％FDA　CMFS溶液を100μlつくる。
3. ウルトラフリーなどの遠心式のメンブレンフィルター（0.2μm）を使ってろ過滅菌する。
4. マイクロスピッツチューブなど、密閉できるチューブに移し、冷凍保存する。

FDAの濃度は高いほど蛍光が強いが、あまり高すぎると注入した細胞に害を及ぼす。0.2〜2％程度の範囲で条件を変えて試してみるとよい。

1. キャビラリーチューブを、キャピラリーチューブ保持台に差し込む。
2. ゲルローダーチップを使って、キャピラリーチューブに2〜3μlほどの0.5％FDA溶液をとる。
3. インジェクター（ナノジェクトバリアブル）の針先からFDA溶液を吸って充填する。
4. 100％スタインバーグ液を満たした寒天プレート中にビテリン膜を除いた卵割期胚（1〜16細胞期）を用意する。
5. 卵割期胚の割球に、FDA溶液を4.6〜9.2nl注入する。
6. 胚を100％スタインバーグ液を満たした穴開き寒天シャーレの穴の中へ移す。
7. 注入のときに生じた穴が塞がったら、培養液を徐々に20〜50％スタインバーグ液に換えてやる。

FDA注入割球の子孫は、生きたまま蛍光顕微鏡下で観察可能である。

動物半球右背側細胞にFDAを注入して発生させた神経胚（写真右が前方）

尾芽胚期の切片標本（左から300μm毎の横断面切片）

キャピラリーチューブ：
ヘマトクリット毛細管を7mmほどの長さに切り、片方の端をマイクロバーナーでとかして試験管状にしたもの。使用前にガラスシャーレに入れて乾熱滅菌をしておく。