20031008

260nm の吸光度によるDNAの定量

1 分光光度計のスイッチを入れておく。

2 DNA溶液をフリッピングで軽く混ぜた後、TEで100倍に希釈する。
（99μlのTEに1μlのDNA溶液を加える。）

3 クォーツのセル（黒いやつ）に対照用のTE（DNAを加えていないもの）100μlを入れる。このとき光の通る所を見て、泡が入っていないことを確認する。

4 セルを分光光度計のホルダーにセットし、M3 を押す。セルは底まで押し込むこと。
3　WAVPROGと表示されるはず。なってなかったらもう一度トライ。

5 RNNを押す。
RUN/STOP　 OR　 AUTOZEROと表示され、プリンターが印刷を始める。

6 プリンターが止まったらAUTOZEROを押す。（0点あわせ）

7 TE を完全に除きDNA 希釈液サンプル100μlをセルに入れる。

8 分光光度計にセットし、RUNを押して測定。値を確認する。

9 液をピペットマンで除き、新しいDNA希釈サンプルをセルに入れる。

10 サンプルの数だけ6-7-8の繰り返し。

11 全てのサンプルを測定し終わったら、プリントシートを少し引き出してから切りとる。

12 セルを蒸留水で数回洗う。

13 水を良く除いた後乾燥。

14 他に使う人がいなければ分光光度計のスイッチをきる。

15 260nm の吸光度 × 5 を計算する。これが希釈率100倍のときのDNA濃度(μg/μl)。

16 ついでに260nm の吸光度の値を280nm の吸光度で割っておく。きちんとDNAが取れていれば、この値が1.8~2.0。それ以下ならタンパク質がコンタミしている可能性がある。